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细胞功能检测

返回列表 发布日期： 2024-11-11

技术服务
细胞活力检测	MTS法细胞活性检测
	MTT法细胞活性检测
	CCK8法细胞活性检测
细胞增殖能力检测	EdU法细胞增殖检测
	细胞克隆形成
	细胞周期检测

技术服务介绍：

细胞增殖和活力的检测常常用来检测各种药物对细胞活性的影响。
MTS法细胞活性检测：在活细胞线粒体中的琥珀酸脱氢酶能MTS还原成一种可溶于组织培养基的甲膻化合物, 而死细胞无此功能。这种甲月贊化合物在490nm的吸收值可以直接在96孔板上测量，而不需要另外作处理，操作比 MTT法更为简洁方便。且测量的吸收值所表示的甲臍产物的数量与培养物中活性细胞的数量成正比。细胞增殖越多越快，则颜色越深；细胞毒性越大，则颜色越浅。对于同样的细胞，颜色的深浅和细胞数量呈线性关系。
MTT法细胞活性检测：在活细胞线粒体中的琥珀酸脱氢酶能将外源性MTT还原为不溶于水的蓝紫色甲臍化合物，用二甲基亚W （ DMS O）将其溶解成溶液，用酶标仪测定其浓度（OD490或者570）,从而定量测定细胞的存活比例，细胞增殖越多越快，对应的吸光度越高；细胞毒性越大，对应的吸光度越低。
CCK8法细胞活性检测：CCK-8细胞活性检测试剂中含有WST-8--------------------- 种类似于MTT的化合物，在电子耦
合试剂存在的情况下，可以为线粒体内的脱氢酶验明正身。在脱氢酶作用下，WST-8被还原生成橙黄色的甲瓒产物，用酶联免疫检测仪在OD450nm波长处测定其光吸收值。细胞增殖越多越快，则颜色越深；细胞毒性越大，则颜色越浅。对于同样的细胞，颜色的深浅和细胞数目呈线性关系。
细胞克隆形成：细胞克隆形成实验是用来检测细胞增殖能力、侵袭性、对杀伤因素敏感性等项目的重要技术方法。当单个细胞在体外增殖6代以上，其后代所组成的细胞群体，成为集落或克隆。其中细胞克隆形成率即细胞接种存活率，表示接种细胞后贴壁的细胞成活并形成克隆的数量。贴壁后的细胞不一定每个都能增殖和形成克隆，而形成克隆的细胞必为贴壁和有增殖活力的细胞。克隆形成率反映细胞群体依赖性和增殖能力两个重要性状。

送样要求：

a）　　冻存细胞细胞数1CT6个，细胞密度在60%以上，细胞活力在80%以上，冻存时间不超过6个月，干冰运输；
b）　　复苏细胞，悬浮细胞细胞数3*10"6个，贴壁细胞贴壁率60%以上，要求灌满培养基常温运输，冬天不收复苏细胞；细胞密度在60%以上
c）　　细胞要求无真菌、细菌、支原体、黑胶虫等污染，细胞状态良好；　
d）　　实验用细胞我方不提供免费保存，实验结束后将予以清理，请自行备份；
e）　　所送细胞样品不提供转寄等服务，仅用于该实验服务。
f）　　培养基可常温运输。

交付材料：

电子版实验报告，包括实验过程、所用仪器试剂、原始数据以及EXCEL版数据处理结果。

注意事项：

包括加药处理，药品客户提供，不包含细胞转染，默认5个平行

技术服务
细胞凋亡检测	Annex i n-V/P I双染法细胞凋亡检测
	线粒体膜电位检测

细胞凋亡是一种细胞自主程序性死亡的生理现象，与细胞受到外界刺激后的自我保护机制相关，具有重要的生理学意义。
Annexin-V/PI双染法细胞凋亡检测：流式细胞术检测细胞凋亡常用方法为PI染料和Annexin V双染法。细胞死亡时细胞膜通透性增强，可以使用PI染料区分活细胞和死细胞。与死细胞不同的是，细胞凋亡时还会发生独特的磷脂酰丝氨酸外翻，可以使用经FITC荧光素标记的磷脂结合蛋白Annexin V进行结合。两者双染，达到区分凋亡细胞的目的。
线粒体膜电位检测:细胞膜电位和细胞凋亡有着密不可分的关系，如果细胞膜电位崩溃就会出现细胞凋亡。膜电位变化时色素的分布也随之变化，所以荧光和吸收也会变化。这种变化程度取决于色素的分子数和细胞数的比率、色素的浓度以及细胞的种类。因此可以通过膜电位检测细胞凋亡。
TUNEL法细胞凋亡检测：细胞在发生凋亡时，会激活一些DNA内切酶，这些内切酶会切断核小体间的基因组DNAO基因组DNA断裂时，暴露的3 -OH可以在末端脱氧核昔酸转移酶的催化下加上荧光素（FITC）标记的dUTP,从而可以通过荧光显微镜或流式细胞仪进行检测，这就是TUNEL法检测细胞凋亡的原理。
2. 送样要求：
a）冻存细胞细胞数1CT6个，细胞密度在60%以上，细胞活力在80%以上，冻存时间不超过6个月，干冰运输；
b）复苏细胞，悬浮细胞细胞数3*10"6个，贴壁细胞贴壁率60%以上，要求灌满培养基常温运输，冬天不收复苏细胞；细胞密度在60%以上
c）细胞要求无真菌、细菌、支原体、黑胶虫等污染，细胞状态良好；
d）实验用细胞我方不提供免费保存，实验结束后将予以清理，请自行备份；
e）所送细胞样品不提供转寄等服务，仅用于该实验服务。
f）培养基可常温运输。
3. 交付材料：
电子版实验报告，包括实验过程、所用仪器试剂、原始数据以及EXCEL版数据处理结果。
注意事项：
　　流式凋亡

技术服务
细胞侵袭迁移能力检测	Transwe I I细胞迁移能力检测
	细胞划痕实验
	Transwe I I细胞侵袭能力检测

1 .技术服务介绍：
细胞迁移是指细胞在接收到内源或外源迁移信号后而产生的移动。细胞迁移是通过胞体形变进行的缓慢的定向移动，涉及细胞觅食、伤口痊愈、胚胎发生、免疫反应、感染和癌症转移等生理现象。因此通过对细胞迁移的研究，对阻止癌症转移、异体植皮等医学应用方面具有一定意义。在Transwell实验中，小室底部的8卩m孔径滤膜可以直接模拟细胞迁移的能力，在营养差存在的情况下，细胞通过变形运动进入下腔室，而后通过分析下腔室细胞数量，定量反应细胞的迁移能力。
细胞划痕实验可以直观的观察到细胞迁移的形态和速率，以及细胞修复的能力。在细胞划痕实验中，通过使用无菌工具在贴壁细胞表面划出不同的划痕区，而后按照实验目的进行不同的培养条件培养，培养规定时间后，显微镜下观察细胞向划痕中间运动迁移的能力，挑选同个视野，不同时间点拍照，直观的展示细胞迁移的能力。
细胞侵袭实验则是研究肿瘤细胞对基质膜消化后的迁移运动，肿瘤细胞须经血管基底膜穿入深面间质后才能侵袭组织和转移至远处。细胞侵袭能力检测，目前最常用也是公认最合理的，就是Transwel 实验。通过体外模拟细胞外基质和体内肿瘤发生发展的环境，还原细胞在体内发生侵袭的过程。在Tra nswell实验中，小室底部的8卩m孔径滤膜只能模拟细胞迁移的能力，细胞可以通过变形运动进入下腔室。要进行细胞侵袭实验还需要通过Martrigel胶来模拟细胞外基质，从而真实的反映细胞侵袭的能力。
2. 送样要求：
a）冻存细胞细胞数10"6个，细胞密度在60%以上，细胞活力在80%以上，冻存时间不超过6个月，干冰运输；
b）复苏细胞，悬浮细胞细胞数3*10*6个，贴壁细胞贴壁率60%以上，要求灌满培养基常温运输，冬天不收复苏细胞；细胞密度在60%以上
c）细胞要求无真菌、细菌、支原体、黑胶虫等污染，细胞状态良好；
d）实验用细胞我方不提供免费保存，实验结束后将予以清理，请自行备份；
e）所送细胞样品不提供转寄等服务，仅用于该实验服务。
f）培养基可常温运输。
3. 交付材料：
电子版实验报告，包括实验过程、所用仪器试剂、原始数据以及EXCEL版数据处理结果。
注意事项：
　
细胞划痕

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